Determinación del Rf en Cámara cromatográfica.

La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto a separar

y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria. Así, las moléculas de

soluto se encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que se produce la elución van siendo

desplazadas por la fase móvil. La retención y la selectividad en la separación dependen de los valores

respectivos de las constantes de los diferentes equilibrios químicos que tienen lugar, que están en

función de:

- la polaridad del compuesto, determinada por el número y naturaleza de los grupos funcionales

presentes. Los solutos más polares quedarán más retenidos puesto que se adsorben más firmemente a los

centros activos de la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirán con mayor facilidad.

- naturaleza del disolvente. Así, para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad del disolvente

facilita su desplazamiento en la placa.

La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la

placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas condiciones

cromatográficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño de la cubeta, temperatura, etc.). Debido a

que es prácticamente imposible reproducir exactamente las condiciones experimentales, la comparación

de una muestra con otra debe realizarse eluyendo ambas en la misma placa.

Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresión:

Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida por el eluyente (Y)

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha. Si ésta es

excesivamente grande se obtendrá un valor erróneo del Rf.

Se recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla presenten un Rf medio

entorno a 0.3-0.5. Para compuestos poco polares, se debe utilizar un disolvente apolar como el hexano.

En el caso de compuestos con polaridad media, se aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en

distintas proporciones. Los productos más polares, requieren disolventes más polares como mezclas de

diclorometano/metanol en distintas proporciones.

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